超微量分光光度计凭借其高灵敏度、快速检测和微量样本需求的特点,已成为现代生命科学实验室中核酸与蛋白质定量的核心工具。其核心作用体现在以下三个方面:
一、高灵敏度与宽检测范围,实现精准定量
传统分光光度计需1-2mL样本体积,而超微量分光光度计仅需0.5-2μL样本,通过表面张力固定于检测基座表面,极大降低了珍贵样本(如临床活检组织、稀有细胞裂解液)的消耗。其检测下限可达0.5ng/μL(dsDNA),上限扩展至37,500ng/μL(dsDNA),覆盖从低丰度样本到高浓度纯化产物的全范围定量需求。例如,在NGS文库构建中,可准确测定文库浓度至nM级别,确保文库池均衡性。
二、多波长同步检测,保障数据可靠性
通过230nm、260nm、280nm、320nm四波长同步扫描,可同时获取核酸纯度(A260/A280)、蛋白质纯度(A280/A260)及盐离子污染(A230/A260)信息。例如,纯DNA的A260/A280比值应为1.8-2.0,若低于1.8可能提示蛋白质或苯酚污染;而A260/A230比值低于2.0则表明存在盐类或有机溶剂残留。这种多参数分析模式显著提升了定量结果的准确性,避免了单波长检测的局限性。
三、快速无损检测,优化实验流程
单次检测仅需2-5秒,且样本无需稀释或特殊处理(如荧光染料标记),直接使用原始样本即可完成检测。这一特性在高通量实验中尤为重要——例如,在CRISPR基因编辑实验中,可快速测定gRNA合成产物的浓度与纯度,指导后续转染体系优化;在蛋白质表达纯化过程中,可实时监测洗脱峰中目标蛋白的浓度变化,及时调整收集策略。此外,检测后样本可回收用于下游实验(如PCR、Westernblot),避免了传统方法中样本损耗导致的实验重复。
总结:超微量分光光度计通过微量样本检测、多参数分析和快速无损操作,为核酸与蛋白质定量提供了高效、精准的解决方案,成为现代分子生物学实验室的核心设备。